SERVICIOS OFERTADOS

1. Asesoramiento a los usuarios del servicio de citometría de flujo.

  • Iniciación y entrenamiento de los distintos usuarios que hacen uso por primera vez de los citómetros analizado.
  • Supervisión de las operaciones diarias en los citómetros de flujo analizadores.
  • Asistencia a los usuarios en los problemas con los equipos.
  • Asistencia sobre metodología y diseño experimental.

2. Aplicaciones

  • Análisis multiparamétrico complejo: Mediante la combinación de fluorocromos compatibles con las líneas de láser y filtros o utilización de metales pesados, es posible realizar un inmunofenotipaje. El inmunofenotipaje se refiere a la utilización de herramientas inmunológicas, como anticuerpos acoplados a marcadores para la detección específica de antígenos localizados tanto en el interior como en la superficie de la célula. Permite identificar, enumerar y caracterizar cualquier célula individual o subcomponente celular. Con aplicaciones tan importantes como la identificación de enfermedades hematológicas, desordenes hematológicos, trasplantes, diagnóstico de enfermedades infecciosas, detección de la hemorragia fetomaterna, test de alergia basados en la en la activación de basófilos, activación plaquetaria, diagnóstico y monitorización de enfermedades autoinmunes, identificación y cuantificación de autoanticuerpos, identificación de fenotipos multiresistentes a las drogas en cáncer, cuantificación proteínas solubles, etc.
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  • Detección de genes reporteros: Una de las técnicas más importantes para el estudio de expresión de un gen de interés es la fusión de genes reporteros o informadores, que permiten una determinación rápida y fácil de la actividad de un promotor. En citometría se utiliza mucho GFP como gen reportero.
  • Estudio de procesos de muerte celular: Puede diferenciarse si la célula está en una fase temprana o tardía de la apoptosis, o si por el contrario la muerte ha ocurrido por necrosis. Para ello se cuantifica la cantidad de Annexina-V unida a la fofatidilserina de la superficie de las células apoptóticas, o la internalización de Ioduro de Propidio (IP) o 7-aminoactinomycin (7-AAD), debido a la formación de poros en la membrana celular, típicos de las células necróticas.
  • Ciclo Celular y proliferación celular: En los estudios del ciclo celular pueden diferenciarse las distintas fases de división de una célula, en función de la cantidad de ADN, lo que nos permite calcular índices o ratios entre picos. Las fases que se diferencian en citometría son G0/G1, que corresponde a fase quiescente y de preparación para división con una cantidad de ADN 2n. Fase S, es la parte del ciclo con síntesis de ADN, por lo tanto el marcaje aumenta. Y la fase G2/M, donde aumenta la proporción de ADN el doble (4n). Los marcajes utilizados suelen ser IP, AmCyan, 7-AAD y BrdU, para citometría de flujo y IdU, pRB (Ser807/811), Cyclin B1, Ki67; pHistone H3 (Ser28), para citometría de masas.
  • Ensayos funcionales. Mediante citometría pueden cuantificarse aquellas propiedades dinámicas de las células que pueden modificarse rápidamente gracias a sensores fluorescentes, cuyas propiedades ópticas o de distribución cambian en respuesta al fenómeno de interés. Algunos ejemplos son detección de ROS, o la medida ratiométrica de Fluo/Indo para estudiar el flujo de calcio.

3. Separación celular.

Las separaciones de células o poblaciones celulares homogéneas se realizan con objeto de llevar a cabo posteriormente ensayos bioquímicos, moleculares o de diferenciación celular de poblaciones de interés.